Uso de las instalaciones

UNIDAD de MICROSCOPÍA CONFOCAL

MISIÓN

Dar soporte a aquellos estudios de investigación que requieran microscopía de fluorescencia confocal o video-microscopía.  

DESCRIPCIÓN

Es un Servicio de Apoyo a la Investigación (SAI) dotado de un microscopio confocal que permite la adquisición de imágenes de fluorescencia de muestras fijadas o vivas. El microscopio confocal obtiene secciones ópticas del volumen de una muestra marcada con fluorescencia sin necesidad de invadirla, ofreciendo información sobre la expresión y la localización de moléculas en 3D (xyz) ó 4D (3D+tiempo). Las aplicaciones más frecuentes son la reconstrucción tridimensional de estructuras subcelulares, células o tejidos; los estudios de colocalización de marcadores y la cuantificación de parámetros de interés (intensidad de fluorescencia, área, morfología, densidad celular, etc).

La Unidad de Microscopia Confocal tiene líneas de investigación propias centradas en el diseño y puesta a punto de aproximaciones experimentales, el procesamiento de imágenes y el análisis de datos con el objeto de poder ofrecer un mejor asesoramiento a sus usuarios, habiéndose especializado en los últimos años en el fenotipado in vivo de células individuales en tejidos parafinados o congelados. Este servicio está dirigido a los grupos de investigación del Instituto y de otras instituciones que así lo soliciten.

SERVICIOS OFERTADOS

- Microscopía confocal espectral de muestras fijadas (ej. células, tejidos, órganos clareados).

- Video-microscopía (time-lapse) de muestras vivas en ambiente controlado para temperatura y CO2, mediante cámara digital o en modo confocal.

Tarifas disponibles en www.iisgm.com (Servicios de Apoyo a la Investigación).

TECNOLOGÍA

1. MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA CONFOCAL modelo LEICA-SPE (instalado en 2015)

MODULO CONFOCAL ESPECTRAL:

- AOTF.

- Un detector interno de fluorescencia (PMT) y un detector para campo claro.

- Digitalización de imágenes: 2048 x 2048 pixeles, 8 y 12 bits por canal.

- Velocidad de barrido 400, 600 y 800 Hz (bidireccional optativo); K-scanner.

MÓDULO DE LÁSER

Cuatro láseres de estado sólido: 405, 488, 561 y 635 nm.

MICROSCOPIO INVERTIDO MOTORIZADO DMi8

Objetivos APO cromáticos:

o   ACS APO 10x/apertura numérica 0.30 (seco).

o   ACS APO 20x/0,60 inmersión en agua, glicerol y aceite; corregido para 405nm.

o   ACS APO 40x/1,30 inmersión en aceite.

o   ACS APO 63x/1,30 inmersión en aceite.

o PL-APO 63x/1,3 de inmersión en agua, glicerol y aceite.

Iluminación con lámpara de fluorescencia (EL6000, lámpara de haluro) y LED blanco para luz transmitida.

Platina galvanométrica.

Cuatro bloques de fluorescencia (tipo): “Dapi”, “Fitc”, “Rhodamina” y “Cy5”.

Control ambiental (temperatura y CO2) para experimentos con células o tejidos vivos.

EQUIPO INFORMÁTICO

Ordenador basado en Windows 7.

Software: LAS-X con herramientas de cuantificación y un módulo adicional LAS-AF 3D (reconstrucciones, proyecciones y rendering 3D).

2. CÁMARA DIGITAL

Cámara sCMOS Orca Flash 4.0 LT acoplada al microscopio DMi8.

INSTALACIÓN

El SAI Microscopía Confocal está ubicado en el Pabellón de Medicina y Cirugía Experimental del

IiSGM. Dispone de 19,2 m2 acondicionados con especificaciones propias de red eléctrica y climatización para cumplir con los requisitos de calidad propios de los servicios ofertados.

CONTACTO

Responsable de la Unidad: Dr. RAFA SAMANIEGO

Tfno. 91 426 9256; e-mail: confocal@hggm.es

Pabellón de Medicina y Cirugía Experimental (planta 1ª)

Hospital General Universitario Gregorio Marañón

c/ Doctor Esquerdo, 46; Madrid 28007

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